30 Sep Columnas bioZen™. Serie biológica de Phenomenex
Columnas bioZen Phenomenex | Proteínas HPLC UHPLC Biocompatibles
Phenomenex bioZen ofrece una trayectoria del flujo biocompatible con estructura y frita cubiertas de titanio que minimizan la necesidad del cebado y no interfieren con la integridad de las proteínas ni péptidos. Las columnas bioZen son soluciones especializadas para análisis de heterogeneidad de carga de anticuerpos monoclonales, mapeo de péptidos, análisis de agregados, glicanos, cuantificación de péptidos, relación anticuerpo-fármaco, masa intacta y análisis de proteínas intactas y fragmentos.
Trayectoria BioTi™ Biocompatible
Relájese al saber que hemos minimizado la necesidad del cebado con una nueva estructura y frita biocompatibles cubiertas de titanio que no interfieren con la integridad de las proteínas ni péptidos. La estructura BioTi™ de titanio está diseñada para limitar las interacciones secundarias indeseadas, sustancias de acarreo problemáticas y dificultades de recuperación entre la inyección y la detección.
Sistemas de Cartuchos SecurityGuard™
Los nuevos sistemas de cartuchos SecurityGuard™ Standard y ULTRA eliminan los contaminantes indeseados antes de que obstruyan su columna o sistema. Cada columna bioZen™ tiene su precolumna para asegurar la estabilidad en el trabajo diario. Aumente la duración de la columna protegiéndola de partículas y contaminantes.
Tres Plataformas Innovadoras de Partículas
Las tres nuevas plataformas de partículas bioZen™ fueron diseñadas y creadas individualmente por Phenomenex para obtener la máxima ventaja de los niveles fundamentales de rendimiento, robustez y reproducibilidad para aplicaciones de caracterización de proteínas.
Totalmente Porosa Modificada Térmicamente
Mediante una serie de procesos térmicos patentados, se eliminan los microporos, obteniendo así una columna más inerte con mejor consistencia, eficiencia, robustez y reproducibilidad.
Tecnología Core-Shell
Usando la técnica sol-gel que incorpora la tecnología de nano estructuración, se forma una cubierta porosa, homogénea y duradera que envuelve el núcleo sólido de sílica. Este proceso sumamente optimizado produce columnas altamente reproducibles que elevan la eficiencia y sensibilidad.
Partícula Polimérica No Porosa de Tamaño Uniforme
La tecnología de partículas de tamaño uniforme controlada meticulosamente asegura una excelente homogeneidad de partículas que ofrece una eficiencia superior y reproducible. Esta innovadora partícula no porosa funciona como la columna vertebral perfecta para el intercambio de iones en mezclas químicas complejas.
Ocho Composiciones Químicas de Partículas
Con una sola línea de productos innovadores que abarca las principales áreas de trabajo biológicas, ahora puede descansar y dejar de revisar múltiples catálogos y proveedores. Las composiciones químicas de partículas de alta calidad están diseñadas y probadas para productos biológicos.
Proteína se Encuentra con Ciencia de Separación
El talento de Phenomenex está a su disposición con exhaustiva experiencia en todas las áreas referente a la composición química, conjugación, preparación de muestras, análisis y detección de proteínas.
Mapeo de Péptidos
Los anticuerpos monoclonales (mAb) digeridos o conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) incluyen una amplia gama de compuestos cruciales para comprender las modificaciones posteriores. Las dos columnas bioZen™ Peptide ofrecen perfiles de retención muy útiles y únicos con ventanas de elución más rápidas y picos más definidos con mayor capacidad y sensibilidad general.
Análisis de Agregados
Con la frecuente presencia de agregados de mAb a niveles muy bajos (0.1% por área comparado con el monómero) y la separación de fragmentos como requerimiento, la resolución y forma de pico se convirtieron en objetivos más cruciales. La robusta línea de columnas bioZen™ de exclusión por tamaño fue desarrollada con una combinación de eficiencia y alta sensibilidad del UHPLC para obtener resolución e identificación de los niveles más bajos de analitos.
La consistencia de partículas altamente inertes en ambas columnas bioZen™ SEC producen mayor reproducibilidad de una inyección a otra. Combine esto con la estructura bioinerte BioTi™, y no se perderá una buena recuperación de agregados.
Análisis de Heterogeneidad de Carga de Anticuerpos Monoclonales
bioZen WCX fue diseñada para descifrar de manera consistente entre las variantes de proteínas nativas que surgen de las modificaciones postraduccionales (PTMs). Las partículas poliméricas no porosas de tamaño uniforme contienen cadenas lineales de policarboxilato que envuelven y separan las proteínas de las variantes ácidas y básicas.
Las partículas poliméricas no porosas de tamaño uniforme sirven como el vehículo perfecto para las cadenas de policarboxilato, asegurando que la bioZen™ WCX sea resistente a los complejos sistemas de gradiente de concentración de sal y de pH.
Análisis de Glicanos
La exclusiva selectividad de la bioZen Glycan fue diseñada para proporcionar mejores separaciones de los glicanos liberados y etiquetados. Con una partícula core-shell de 2.6µm, los usuarios que tengan sistemas HPLC o UHPLC pueden usar la columna bioZen Glycan para obtener resultados de alta eficiencia con formas de picos más definidas en tiempos de corridas más rápidos.
bioZen N-Glycan Clean-Up SPE
Una novedosa fase estacionaria HILIC para extracción en fase sólida (SPE) que se destaca en la retención y recuperación de glicanos etiquetados y liberados. Disponible en formato de placa de microelución de 96 pocillos para procesamiento y limpieza de pequeños volúmenes de muestra.
Cuantificación de Péptidos
Al cuantificar péptidos distintivos de las matrices biológicas, necesita formas de picos definidas y una retención suficiente de los péptidos hidrofílicos para evitar pérdida de señal. Las dos columnas bioZen™ Peptide fueron desarrolladas para dar excelente selectividad incluso entre los péptidos más similares.
La bioZen Peptide XB-C18 bloquea las interacciones superficiales secundarias mediante la cadena lateral de isobutilo, mientras que la bioZen Peptide PS-C18 contiene una base débil con carga positiva que repele otras especies básicas.
Análisis de Proteínas Intactas y Fragmentos
La identificación y caracterización de impurezas de fragmentos biológicos intactos es un desafío por las mínimas diferencias entre las variantes. Las dos columnas bioZen Intact poseen partículas core-shell fabricadas especialmente con poros grandes para que ofrezcan picos más altos y delgados con mayor resolución entre las HC/LC, Fc/Fab o sus isoformas.
Masa Intacta
La masa intacta puede dar indicaciones no solo de la abundancia relativa de glicoformas, sino también de la estabilidad, ya que los mAb degradados no darán una buena carga mediante ESI-MS. La masa intacta con espectrómetro de masas de alta resolución funciona perfectamente con los rápidos tiempos de análisis y las formas de picos delgados que proporcionan las columnas bioZen™ Intact C4 y XB-C8.
Relación Anticuerpo-Fármaco (DAR)
Con un efecto directo en la eficacia y la seguridad, debe comprenderse bien la conjugación de cada ADC. La bioZen Intact XB-C8 ofrece un vehículo excelente para determinar la distribución de la carga de fármaco y la relación anticuerpo-fármaco (DAR). Su poro de gran tamaño permite que los ADC intactos interactúen con una fase estacionaria moderadamente retentiva mientras que las partículas core-shell brindan mayor eficiencia para la resolución necesaria entre las especies de ADC.
Bio Controles de Calidad
En cada etapa de los controles de producción y calidad se tiene a los usuarios y a los análisis de productos biológicos en mente. Se concentran en productos innovadores que mejorarán los flujos de trabajo y se trabaja incansablemente para asegurar que esos productos sean confiables una y otra vez.
Cada lote de medios y cada columna pasa por una serie de controles para asegurar que está recibiendo la ciencia de Phenomenex en su mayor nivel.
El Flujo bioZen™: Selección de Columna
A través del desarrollo de elementos biológicos, los productos de separación bioZen ofrecen una mejor caracterización en una amplia variedad de técnicas.
Consejos Zen: Maestros en Separación de Proteínas
Exclusión por Tamaño y Buffer Saturado con Sal
Al desarrollar un método para el análisis de agregados de mAb por SEC, resulta crítico optimizar las condiciones de la fase móvil para evitar interacciones secundarias no específicas. Un buen punto de partida para el desarrollo del método es 50mM de fosfato potásico, 250mM de cloruro de potasio, pH 6.8.
Sobre la Desglicosilación: ¿Cómo Desglicosilar Anticuerpos?
PNGase F es una endoglicosidasa que se adhiere a los N-glicanos sin preferencia, a excepción de los que están fucosilados a(1-3). La mayoría de los protocolos para PNGase F se desarrollaron originalmente para desglicosilar glicoproteínas complejas con múltiples sitios de glicosilación.
Para una glicoproteína menos compleja como una IgG1 (2 puntos de glicosilación en la región conservada en Asn297), es aceptable un tiempo de digestión más corto. De hecho, la mayoría de los proveedores venden PNGase F formulada para una desglicosilación más rápida, en algunos casos de diez minutos o menos.
¿Por Qué Desglicosilar Anticuerpos Antes de Masa Intacta?
Dependiendo de cuántas glicoformas diferentes pueda tener la muestra, un grado alto de complejidad en la glicosilación puede llevar a espectros bastante desordenados, especialmente difícil con ADC.
La desglicosilación del N-glicano produce ácido aspártico (Asp), lo que genera un cambio de masa a 1 Da. El buffer para reacciones con PNGase F es, típicamente, Tris, con un pH relativamente alto. Se puede observar desamidación, comúnmente con el motivo NG, por lo que se desean protocolos de desglicosilación más rápidos.
Capacidad de Carga para SEC y Fase Reversa
Para la exclusión por tamaño, existen dos consideraciones: volumen de muestra y concentración de la muestra. Por regla general, no cargue más del 5% del volumen de la columna. Una columna de 300×4.6mm, con un volumen de ~5ml, tendría un volumen de inyección límite de 200µl. En la práctica, son comunes los volúmenes de 10-30µl.
La concentración de la muestra es importante; cuanto mayor sea la concentración de proteína, mayor será la viscosidad y puede provocar distorsión en la forma de los picos. Un buen punto de partida es 1mg/ml.
Capacidad bioZen™ Peptide: Se pueden cargar 5-20µg de mezcla peptídica o digestión en una columna de 4.6mm DI para buena sensibilidad. Hasta 50µg sin aumentar demasiado el ancho de los picos.
Capacidad bioZen™ Intact: Debido a su área superficial menor, la carga tiene consecuencias drásticas. Para 4.6mm DI, 5µg es un buen punto de partida. Para 2.1mm DI, 1µg es un buen punto de partida.
Solvente Orgánico y Exclusión por Tamaño
Para obtener una separación SEC “ideal” (separación puramente entrópica, sin interacción del analito con la fase estacionaria), a menudo podría necesitarse un modificador orgánico, 5-15% isopropanol o acetonitrilo.
La mayoría de los métodos para ADC usan solventes orgánicos, de los cuales el 15% IPA es el más común. Esto está ampliamente aceptado para evaluar los agregados.
Limpieza de Columnas para Proteínas
Si se sospechan interacciones iónicas fuertes, comience limpiándola con un desnaturalizante como hidrocloruro de guanidinio 6 M o 10% DSM. Si la proteína es relativamente hidrofóbica, enjuáguela con un tampón con 95-100% agua, luego limpie con una gradiente desde 95% agua 5% acetonitrilo hasta 5% agua 95% acetonitrilo por los 3-5 volúmenes de la columna. Tenga cuidado de que las presiones no excedan los límites recomendados.
Protección Biocompatible
La manera más fácil de aumentar el rendimiento de una columna y minimizar el deterioro costoso del sistema y el detector es evitando que en la columna entren contaminantes y partículas. Los sistemas de cartuchos protectores SecurityGuard brindan esta protección verdaderamente facilitan la incorporación de este beneficio para los sistemas HPLC y UHPLC.
Limpieza Selectiva para Volúmenes Pequeños
Con su formato de placa de microelución, tanto el sorbente polimérico Strata-X para SPE como bioZen N-Glycan Clean-Up ofrecen dos grandes beneficios: mejor recuperación absoluta y mayor ahorro de tiempo.
bioZen N-Glycan Clean-Up por SPE
Una fase estacionaria HILIC que se caracteriza por una óptima retención y recuperación de N-glicanos etiquetados y liberados.
Strata X: Sorbente Polimérico para SPE
Desalinice su muestra antes de inyectarla en su columna para obtener resultados más precisos y mayor vida útil de la columna.
Contacto Phenomenex
Más información:
www.cosmobio.com.ar
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